کلونینگ و بیان قطعه 193 اسید آمینه ای انتهایی آنزیم آلفا آمیلاز از سویه باسیلوس kr8104 و بررسی ساختاری با استفاده از طیف سنجی دورنگ نمایی دورانی و فلورسانس

بخش 193 اسید آمینه ای انتهای کربوکسیل آنزیم آلفا آمیلاز از سویه باسیلوس kr8104 قطعه پروتئینی می باشد که توسط بخش انتهایی ژن کدکننده آنزیم مربوطه کد می شود ولی در آنزیم ترشح شده از این باکتری دیده نمیشود. با توجه به مشاهدات انجام شده این سئوال مطرح می باشد که نقش قطعه 193 اسید آمینه ای انتهای کربوکسیل چیست و چرا این قطعه توسط ژن مربوط به این آنزیم کد می شود در حالی که به نظر می رسد آنزیم مربوطه بدون حضور آن فعالیت خود را می تواند انجام دهد. در تحقیق انجام شده در این پایان نامه ما بخش ژنی کد کننده این قطعه انتهایی را به تنهایی و با کمک یک حامل بیانی در باکتری اشرشیا کلی کلون نمودیم و پس از بیان و خالص سازی قطعه پروتئینی 193 اسید آمینه ای انتهایی نقش های احتمالی که ممکن بود این قطعه 193 اسید آمینه ای داشته باشد مانند نقش چاپرونی، نقش مهار کنندگی و نقش کمک ترشحی را با استفاده از روشهای بیوشیمیایی مورد مطالعه و بررسی قرار دادیم. همچنین ساختار دوم این قطعه پروتئینی را با استفاده از روش طیف سنجی دورنگنمایی دورانی در آب و حلال های تقلید کننده شرایط غشایی مطالعه نمودیم و با ساختار دوم قطعه پروتئین انتهایی کربوکسیل مشابه موجود در آنزیم آلفا آمیلاز از سویه altermonas haloplanctis مورد مقایسه قرار دادیم. در ادامه مطالعه ساختار پروتئین در حضور و عدم حضور حلال های تقلید کننده شرایط غشایی با استفاده از روش فلورسانس انجام شد. نتایج مطالعات بیوشیمیایی نشان داد که قطعه193 اسید آمینه ای انتهای کربوکسیل کد شده توسط بخش ژنی انتهایی کد کننده آنزیم آلفا آمیلاز از سویه باسیلوس kr8104 نقش چاپرونی و مهارکنندگی را دارا نمی باشد و با توجه به نتایج حاصل از روشهای بیوشیمیایی و روش طیف سنجی دورنگ نمایی دورانی و فلورسانس این احتمال وجود دارد که قطعه انتهای کربوکسیل مانند قطعه انتهای کربوکسیل آنزیم آلفا آمیلاز باکتری altermonas haloplanctis یک کمک کننده ترشحی باشد.